微透析技术作为一种活体取样方法,在大小鼠实验研究中广泛应用。其核心部件——大小鼠微透析探针的正确使用和妥善保存直接影响实验数据的质量和动物福利。以下是详细的操作指南:
1. 实时状态监控
配备在线紫外检测器的系统应每小时记录一次吸光度图谱,及时发现蛋白质吸附导致的信号漂移。单纯依靠手动收集样本时,每管样品开始收集前需丢弃前两滴液体以消除死体积影响。
2. 抗干扰措施实施
为减少动物自主活动产生的机械扰动,建议采用柔性固定臂配合重量平衡装置。对于清醒动物实验,可通过训练建立操作性条件反射实现主动配合,降低应激反应带来的生理指标波动。
3. 样本时效性管控
收集后的透析液应立即置于冰上暂存,并在2小时内完成冷冻保存。若需长时间储存,建议添加蛋白酶抑制剂并分装于预硅化的EP管中,避免反复冻融破坏待测物稳定性。
二、大小鼠微透析探针回收处理与清洗再生
1. 安全取出流程
实验结束后先降低灌流速度至0.5μL/min维持10分钟,使周围组织逐渐适应无刺激状态。轻柔旋转拔出探针,立即用生理盐水冲洗外部可见血迹,随后进入标准化清洗程序。
2. 分级清洗方案
① 基础清洗:依次用去离子水、75%乙醇超声震荡各15分钟;② 深度脱脂:丙酮浸泡过夜后氮气吹干;③ 灭菌处理:高压蒸汽灭菌(121℃/20min)或环氧乙烷气体熏蒸。不同材质探针对消毒方式有特定要求,金属型可选择高温灭菌而纤维束型仅限低温法。
3. 性能验证标准
再生后的探针需通过跨膜通量测试方可重新投入使用。常用方法包括荧光素钠通透性实验和反渗试验,要求恢复率达到初始值的90%以上才算合格。不合格者应及时淘汰并记录报废原因。
三、大小鼠微透析探针长期存放维护策略
1. 干燥保存环境
清洗干燥后的探针应存放于充氮密闭容器内,内置变色硅胶指示剂监控湿度变化。相对湿度必须控制在30%以下以防止霉菌生长,必要时可投放分子筛干燥剂包增强吸湿效果。
2. 避光防氧化措施
包装材料选用不透光铝箔袋真空封装,加入抗氧化剂(如维生素C粉末)。储存柜应远离窗户摆放,避免紫外线加速材料老化。定期抽检存放样品的颜色变化情况作为质量预警指标。
3. 周期性巡检制度
建立电子档案管理系统记录每个探针的使用次数、清洗历史和性能参数。每月随机抽取库存中的10%进行外观检查和流量测试,确保随时可用状态。超过半年未使用的探针启用前需重新校准。
