大小鼠微透析探针正确使用方法：精准采样的关键步骤

　　在神经科学、药理学和生理学研究中，大小鼠微透析技术是一种重要的活体取样方法，能够实时获取细胞外液中的小分子物质（如神经递质、代谢产物等）。而大小鼠微透析探针作为该技术的核心工具，其正确使用直接关系到实验数据的质量和动物福利。以下是详细的操作指南与注意事项：

　　一、大小鼠微透析探针实验前准备与检查

　　1. 系统完整性验证

　　开箱后首先确认包装内的组件是否齐全：包括探针本体、连接管路、灌流液容器、恒流泵及固定装置等。特别要检查探针膜区的通透性——轻轻吹气测试是否有均匀气流排出，确保无堵塞或破损。若发现膜表面有划痕或裂纹，应立即更换新探针以避免样本污染。

　　2. 灌流液配制与脱气处理

　　根据实验目的选择合适的人工脑脊液（aCSF）配方，并加入必需的添加剂（如K通道阻滞剂）。配制完成后需进行超声波脱气至少15分钟，去除溶解氧以外的气体气泡。未充分脱气的灌流液可能导致流量不稳定甚至断流，严重影响回收率。建议使用在线过滤器进一步净化液体，防止微粒阻塞微孔道。

　　3. 参数预校准

　　将恒流泵设置为低流速模式（通常为1-5μL/min），观察实际输出是否符合理论值。可通过称重法验证单位时间内收集到的液体重量来校正泵速误差。同时调整压力传感器阈值报警功能，以便及时察觉管路异常情况。

　　二、大小鼠微透析探针植入手术关键技巧

　　1.麻醉深度把控

　　采用腹腔注射戊巴比*钠的方式维持麻醉状态，期间持续监测角膜反射和脚趾夹捏反应以确保镇痛效果适度。过深抑制自主呼吸会干扰生理指标；过浅则引发应激反应导致皮质醇升高，两者均会影响目标区域的代谢水平。推荐配合体温控制系统保持直肠温度在37±0.5℃范围内。

　　2.立体定位精度控制

　　利用脑立体定位仪时，务必反复核对Bregma点作为原点的坐标体系。对于纹状体靶向实验，典型坐标约为AP+0.8mm, ML±3.0mm, DV-4.5mm（相对于颅骨表面）。钻孔过程中使用低速钻头配合生理盐水冷却降温，避免热损伤周围组织。暴露硬脑膜后勿强行剥离，可用细小弯镊轻柔分开以减少出血风险。

　　3.缓速插入策略

　　手持显微操作臂以约1mm/s的速度匀速下插探针，遇到阻力时立即暂停并回退少许重新调整角度。切忌暴力推进造成机械性创伤！当探针尖*抵达预定深度后，用牙科水泥或专用夹持器稳固于颅骨螺丝上，防止因头部移动导致的微位移。此时可通过显微镜确认膜区全浸没于目标脑区。

　　三、大小鼠微透析探针灌流平衡期管理

　　1.基线稳定化流程

　　启动恒流泵后先以较高流速冲洗系统30分钟，排除空气泡和杂质颗粒。随后降至实验设定流速继续灌流90-120分钟，直至基线信号波动小于5%。在此期间定期采集空白样本检测背景噪音水平，必要时延长平衡时间直至信号平稳。注意避免频繁开关泵影响流体动力学稳定性。

　　2.实时监控要点

　　密切关注入口压力变化曲线，突然升高可能提示探针堵塞；持续下降则暗示漏液发生。同步记录动物生命体征参数（心率、血氧饱和度），确保生理状态稳定。若使用多通道系统，不同颜色的染料可帮助区分各通路是否正常工作。